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正常小鼠免疫功能的分析(精宏DKB-501使用)

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-12-26 10:51【

多糖是由多個單糖分子以糖苷鍵結(jié)合而成的天然大 分子化合物,廣泛存在于動、植物及微生物體內(nèi),在抗肝 炎、抗病毒、抗腫瘤、抗心血管疾病、抗衰老、提高免疫力、 降糖等方面具有特殊的生物活性。靈芝、螺旋藻和鎖陽 的主要活性成分之一均是多糖。如靈芝多糖能夠增強腫瘤 小鼠巨噬細胞的吞噬功能,促進淋巴細胞增生,增強 T 殺 傷細胞的細胞毒作用,促進細胞因子如白細胞介素等;螺 旋藻多糖能增強小鼠骨髓細胞增殖能力,促進胸腺、脾臟等 免疫器官的生長和促進血清蛋白的生物合成;鎖陽多糖能 提高衰老小鼠巨噬細胞吞噬能力和脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力。


1 材料與儀器 


1.1 實驗動物 


健康昆明種雄性小鼠,8~10 周齡,體質(zhì)量(20±2) g, 由蘭州大學醫(yī)學部實驗動物中心提供。動物合格證號為: 甘醫(yī)動字第 14-006。 1.2 儀器 DKB-501 數(shù)顯超級恒溫水浴鍋 (上海精宏實驗設(shè)備有限公司);微量進樣器(上海安亭微量進樣器廠);游標卡 尺(安徽量具刀具廠);AL204 電子天平[梅特勒—托利多 儀器(上海)有限公司];722 型可見光光度計(上海光譜儀 器有限公司);DD5M 立式大容量離心機(湖南凱達科學儀 器有限公司);SKJH-2112 超凈工作臺(上海蘇坤實業(yè)有限 公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;冷凍干燥機。 


1.3 材料與藥品 


螺旋藻干粉、靈芝干粉、鎖陽干粉,均由甘肅省微藻工 程技術(shù)研究中心提供;綿羊紅細胞(SRBC)、豚鼠血清、小 牛血清均購自北京元亨金馬生物科技開發(fā)有限 公 司); 95%乙醇、氯仿、正丁醇、葡糖糖、5%苯酚、濃硫酸、氯化 鈉、氯化鉀、硫酸鎂、氯化鎂、氯化鈣、磷酸氫二鈉、磷酸二 氫鉀、碳酸氫鈉、檸檬酸鈉均為分析純。 1.4 方法與步驟 1.4.1 螺旋藻、靈芝、鎖陽 3 味單味藥的粗多糖提取 稱取 螺旋藻、靈芝、鎖陽干粉各 100 g,分別按料液比 1∶10 分別加 入蒸餾水浸泡 2 d,各加入 1 g 纖維素酶和 1 g 果膠酶,50 ℃ 水浴提取,過濾,離心 10 min,取上清液。循環(huán)提取 2 次,合并 上清液,減壓濃縮,Sevage 法除蛋白,乙醇沉淀,真空冷凍干 燥,分別獲得螺旋藻、靈芝、鎖陽單味藥的粗多糖干粉。 1.4.2 螺旋藻、靈芝和鎖陽的復合粗多糖制備 采用硫 酸-苯酚法分別測定螺旋藻、靈芝、鎖陽 3 味單味藥的粗多 糖含量。螺旋藻粗多糖含糖量為 30.8%,靈芝粗多糖含糖 量為 44.9%,鎖陽粗多糖含糖量為 40.9%。將分別制備的 螺旋藻粗多糖干粉、靈芝粗多糖干粉和鎖陽粗多糖干粉,按 照多糖含量為 1∶1∶1 的比例制成復合多糖,4 ℃冷藏備用。 1.4.3 動物分組及給藥 將小鼠按體質(zhì)量隨機分為 5 組,每 組 10 只,分別為正常對照組,螺旋藻多糖組(100 mg/kg·bw), 復合粗多糖低劑量組(50 mg/kg·bw)、中劑量組(100 mg/kg·bw)、 高劑量組(200 mg/kg·bw),連續(xù)灌胃 21 d,正常對照組灌 胃生理鹽水。


2 效果


與正常對照組相 比,螺旋藻多糖組與復合粗多糖組均可顯著提高正常小鼠 的脾指數(shù)與胸腺指數(shù)(P<0.05),且隨著復合粗多糖劑量的 增加,脾指數(shù)與胸腺指數(shù)呈劑量效應(yīng);復合粗多糖組與螺 旋藻多糖組比較,中劑量復合粗多糖組、高劑量復合粗多 糖組的脾指數(shù)與胸腺指數(shù)顯著高于螺旋藻多糖組(P<0.05), 低劑量復合多糖組脾指數(shù)與胸腺指數(shù)均略高于螺旋藻多 糖組,差異不顯著(P>0.05)。表明粗多糖能提高小鼠的脾指數(shù)與胸腺指數(shù),中劑量復合粗多糖、高劑量復合粗多糖 比單味藥螺旋藻多糖效果更顯著。


3 分析 


3.1 不同來源的多糖具有各自的生物活性


現(xiàn)代研究證 明,一些多糖共同作用時,效果比單一多糖更佳,藥效呈現(xiàn) 協(xié)同性。目前,對復合多糖的研究主要集中在抗腫瘤及免 疫調(diào)節(jié)作用方面。 


3.2 分別灌胃單味藥螺旋藻多糖以及螺旋藻、靈芝和鎖陽 的復合多糖


均可可增加小鼠免疫器官指數(shù),提高腹腔巨 噬細胞的吞噬功能,增強小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)以及提高血 清半數(shù)溶血值。其機制可能因為多糖作為非特異抗原刺激小鼠淋巴細胞的增殖而提高機體細胞免疫和體液免疫功 能;通過促進腹腔巨噬細胞的增值和激活巨噬細胞的吞噬 功能,提高正常小鼠非特異性免疫功能。各指標均反映中 劑量、高劑量復合多糖組作用顯著高于單味藥螺旋藻多糖 組,與黃芪、酵母胞壁和蟲草菌絲體復合多糖以及香菇、靈 芝、灰樹花復合多糖的研究結(jié)果一致,可見復合多糖能 協(xié)同、高效地調(diào)節(jié)正常小鼠免疫機能。




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