0 引言

養(yǎng)殖魚(yú)類頻繁發(fā)生因細(xì)菌引起的疾病，使水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)遭受了極大的損失. 為了防治病害，目前養(yǎng) 殖者多采用傳統(tǒng)的消毒滅菌方法，頻繁大量地施用各種化學(xué)消毒劑、抗菌素類、磺胺類等藥物，這些 藥物因成本高、刺激大、效率低、副作用多，無(wú)法從根本上解決問(wèn)題 . 因此尋找新型實(shí)用的高 效、環(huán)保、安全型殺菌消毒方法，是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)亟待解決的問(wèn)題之一.

1 材料與方法

1. 1 儀器與試劑

精宏SHP-250 型生化培養(yǎng)箱購(gòu)自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司; VS － 1300U 超凈工作臺(tái)購(gòu)自蘇州凈化 設(shè)備有限公司; ZWSSJD30 紫外燈 (功率 30 W，主波長(zhǎng) 254 nm) 產(chǎn)自上海亞明燈泡廠有限公司; 納 米 TiO2，銳鈦型，平均粒度≤15 nm，產(chǎn)自上海珠爾鈉高新粉體材料有限公司.

1. 2 實(shí)驗(yàn)菌種

大腸桿菌 (Escherichia coli) (菌株號(hào): K12 AS1. 365)、嗜水氣單胞菌 (Aeromonas hydrophila) (菌 株號(hào): BS － 1) 由集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院免疫實(shí)驗(yàn)室提供，鰻弧菌 (Vibrio anguillarum) (菌株號(hào): M3) 由集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院病原生物實(shí)驗(yàn)室提供.

1. 3 菌種培養(yǎng)

從 4 ℃冰箱內(nèi)取出嗜水氣單胞菌、鰻弧菌、大腸桿菌 3 種菌種，轉(zhuǎn)接到固體斜面培養(yǎng)基上，置 28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h，使其活化. 之后，將菌種接種到 LB 固體培養(yǎng)基上，通過(guò)劃線法稀釋菌落后 再培養(yǎng)，挑選典型菌落接種到 LB 肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，并進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)以達(dá)到指數(shù)期菌液，供后續(xù)實(shí) 驗(yàn)使用.

1. 4 殺菌效果測(cè)定

將 5 mL 用生理鹽水稀釋的指數(shù)期菌液注入細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，3 組實(shí)驗(yàn)菌液濃度均為 1. 0 × 106 cfu /mL， 加入一定量的納米 TiO2，使其質(zhì)量濃度分別為 0. 01，0. 1，1. 0 g /L，每組分別在紫外燈或日光照射下 進(jìn)行光催化反應(yīng). 用紫外燈為光源時(shí)，光源與培養(yǎng)板之間距離固定為 50 cm，每間隔 30 min 采樣一 次; 用日光為光源時(shí)選擇在晴天 10∶ 00—15∶ 00 時(shí)段內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每間隔 30 min 采樣一次; 空白組不 加納米 TiO2 并置于黑暗的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)按相同時(shí)間間隔采樣. 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定光催 化材料的殺菌率以評(píng)價(jià)其抗菌性能，殺菌率計(jì)算公式為: 殺菌率 = (空白組的菌落數(shù) － 實(shí)驗(yàn)組的菌落數(shù)) /空白組的菌落數(shù) × 100 % .

2 結(jié)果與討論

在紫外光下，當(dāng)納米 TiO2 質(zhì)量濃度為 0. 01 g /L 時(shí)，催化反應(yīng) 60 min，能殺死約 40 % 的大腸桿菌和嗜水氣單胞菌，而對(duì)鰻弧菌的殺滅率為 70 % ，可見(jiàn)納米 TiO2 濃度過(guò)低時(shí)殺菌效 果并不十分理想. 研究也表明納米 TiO2 質(zhì)量濃度過(guò)低時(shí)殺菌率不高. 當(dāng)納米 TiO2 質(zhì)量濃度為 0. 1 g /L 時(shí)，催化 60 min 對(duì) 3 種細(xì)菌的殺滅率皆在 95 % 以上，殺菌率顯著提高. 當(dāng)納米 TiO2 質(zhì)量濃度為 1. 0 g /L 時(shí)，對(duì)細(xì)菌的殺滅率雖然能達(dá)到 98 % 以上，但是由于濃度過(guò)高，溶液已較為混濁，催化劑未得到充分利用.改用日光為光源時(shí)，納米 TiO2 0. 01 g /L 濃度組對(duì) 3 種細(xì)菌的殺菌率都未超過(guò) 50 % ，顯示納米 TiO2 濃度過(guò)低時(shí)殺菌效果并不明顯; 而 0. 1 g /L 和 1 g /L 組的殺菌效果則顯著提高. 雖然在日光催化 時(shí)大腸桿菌的存活率稍高，但大腸桿菌種并不是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的危害菌種，而對(duì)嗜水氣單胞菌和鰻弧菌 這兩種致病菌的殺滅作用高濃度的 2 組都達(dá)到 93 % 以上.

3 結(jié)論

1) 在含有紫外光的光源催化下，納米 TiO2 對(duì)水體病原菌具有較好的殺菌能力. 質(zhì)量濃度為 0. 1 g /L的納米 TiO2 溶液對(duì)嗜水氣單胞菌和鰻弧菌二種致病菌具有強(qiáng)烈的殺滅作用，在紫外燈下 2 h 對(duì)鰻弧菌的殺滅率超過(guò) 98 % ，對(duì)嗜水氣單胞菌的殺滅率達(dá)到 100 % .
2) 對(duì)于納米 TiO2 進(jìn)行光催化作用所需的光源，以往的研究大多認(rèn)為必須在紫外光照射時(shí)才有明 顯的滅菌效果 . 而本實(shí)驗(yàn)在日光下進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，納米 TiO2 在自然環(huán)境中只需日光照射就 可具有良好的滅菌效果，日光催化效果與紫外光催化效果相近，無(wú)需額外使用人造光源，這有利于該 技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的推廣應(yīng)用.



 

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