山 茱 萸 為 山 茱 萸 科 植 物 山 茱 萸 Cornus officinalis Sieb. Et Zucc.的干燥成熟果肉，其性味 酸、澀，微溫，具有補(bǔ)益肝腎、收澀固脫等功效， 可用于治療眩暈耳鳴、腰膝酸痛、陽(yáng)痿遺精、大 汗虛脫和內(nèi)熱消渴等[1]。山茱萸經(jīng)過(guò)除去果核并干 燥后可得其飲片山萸肉。

1 儀器與試藥 

1.1 儀器 

ZCY-15B 數(shù)控超級(jí)恒溫槽(寧波天恒儀器廠)； Rotavapor R-200 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、V-700 真空泵均來(lái)自 BüCHI 公司；冷卻 CA-1111 水循環(huán)裝置(東京理化器械株式會(huì)社)；DHG-9123A 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 (上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；1260 高效液相色譜 儀，配四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外 檢測(cè)器、OpenLAB ChemStation 工作站(Agilent 公 司)；XS105D 電子天平(瑞士 Mettler-Toledo 公司)； ZLG-5 噴霧干燥機(jī)(杭州錢江干燥設(shè)備有限公司)； GZL100-25L 干法制粒機(jī)(石家莊科源機(jī)械設(shè)備有 限公司)。 

1.2 試藥 

乙腈、甲醇(色譜純，德國(guó) Merck 公司)；甲酸 (色譜純，ROE 公司)；去離子水由水純化系統(tǒng) (Milli-Q，德國(guó) Millipore 公司)制備，每日新制； 莫諾苷(純度>98%，批號(hào)：170224)和馬錢苷(純 度>98%，批號(hào)：170112)均購(gòu)自上海融禾醫(yī)藥科技 有限公司。糊精、可溶性淀粉、麥芽糊精和山萸 肉(批號(hào)：S20161206；產(chǎn)地：陜西)均由九洲方圓 制藥有限公司提供。 

2 分析方法 

2.1 總固體含量 

精密量取制得的山萸肉提取液適量于事先干 燥至恒重的玻璃稱量瓶中，置干燥箱中于 105 ℃ 烘 3 h，稱定烘干前后質(zhì)量，計(jì)算得到總固體含量。 

2.2 莫諾苷和馬錢苷的含量 

2.2.1 色譜條件

色譜柱為 Eclipse XDB-C18 柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為 0.5%甲酸水 溶 液 (A)-0.5%甲酸乙腈溶液 (B)；洗脫梯度為 0~10 min，1%→2%B；10~20 min，2%→10%B； 20~23 min，10%→11%B；23~33 min，11%B； 33~55 min，11%→40%B；55~60 min，40%→50%B； 60~61 min，50%→100%B；柱溫為 35 ℃；流速為 1.0 mL·min?1；檢測(cè)波長(zhǎng)為 240 nm；運(yùn)行時(shí)間為 70 min；色譜圖記錄時(shí)間為 60 min。 

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備及測(cè)定 

取莫諾苷和馬 錢苷對(duì)照品適量，精確稱重，加入甲醇溶解制成 濃度為 1.960 mg·mL ?1 和 1.016 mg·mL ?1 的混合儲(chǔ) 備液，再將其稀釋至一系列濃度，按“2.2.1”項(xiàng) 下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。莫諾苷和馬錢苷的線性回 歸 方 程 分 別 為 Y=35.1X+1 055.7(r=0.999 9) ， Y=32.6X+281.1(r=1.000 0)。 

2.2.3 供試品溶液的制備及測(cè)定 

取山萸肉提取 液約 2 g，精密稱定于 5 mL 量瓶中，加水溶解定 容，搖勻，再以 12 000 r·min?1 離心 10 min，取上 清液后按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定其中的莫諾苷含量和馬錢苷含量。莫諾苷和馬錢苷與周圍 色譜峰分離良好。色譜圖見(jiàn)圖 1。

2.3 數(shù)據(jù)處理 

單位質(zhì)量飲片的莫諾苷產(chǎn)量、馬錢苷產(chǎn)量和 出膏率的計(jì)算公式分別如下：莫諾苷產(chǎn)量=(提取液 中莫諾苷濃度×提取液總質(zhì)量)/飲片質(zhì)量；馬錢苷 產(chǎn)量=(提取液中馬錢苷濃度×提取液總質(zhì)量)/飲片 質(zhì)量；出膏率=(提取液總固體含量×提取液總質(zhì) 量)/飲片質(zhì)量×100%。

3 提取工藝優(yōu)化 

3.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇 

苷類是山茱萸中重要的藥效成分，其中莫諾 苷具有抗氧化、抗凋亡、促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)的作用[8]； 馬錢苷則具有免疫調(diào)節(jié)、抗休克、抑制前脂肪細(xì) 胞分化等作用[9]。2015 版中國(guó)藥典中山茱萸含量 測(cè)定的指標(biāo)性成分為莫諾苷和馬錢苷。因此，本 研究將莫諾苷產(chǎn)量和馬錢苷產(chǎn)量作為提取和濃縮 等工藝的評(píng)價(jià)指標(biāo)。總固體中包含有糖類、酚類、 苷類、黃酮、蒽醌、甾體等化學(xué)物質(zhì)，可以從總 體上體現(xiàn)提取和濃縮等工藝所得產(chǎn)物量的多少， 所以本研究也將出膏率作為工藝評(píng)價(jià)指標(biāo)。 

3.2 山萸肉提取液的制備 

根據(jù)《征求意見(jiàn)稿》制備山萸肉提取液：取 山萸肉約 150 g 于提取罐中，浸泡一定時(shí)間，提取 2 次，每次提取相同時(shí)間，趁熱用 100 目濾布過(guò)濾， 合并 2 次提取液。 

3.3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 

采用 L9(34 )正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化浸泡時(shí)間(A，min)、加水量(B，mL·g ?1 )和提取時(shí)間(C，min)等 3 個(gè)因素，條件選擇時(shí)參考了《征求意見(jiàn)稿》中的 要求：浸泡一般≥30 min，果實(shí)種子類中藥材一般 加入 8 倍的水，煎煮時(shí)間一般為沸騰后再煎煮 30 min。所以，正交試驗(yàn)中浸泡時(shí)間、加水量和提 取時(shí)間的低水平分別定為 30 min，7 mL·g ?1 和 30 min。

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